Plasmide CRISPR d'Activation (h) DRAK1: sc-411260-ACT

STK17A code pour DRAK1, une kinase sérine/thréonine de la famille des kinases associées à la mort cellulaire (death-associated protein kinase) qui module la signalisation en réponse au stress et les décisions de destinée cellulaire. DRAK1 a été associée à la régulation des voies de l’apoptose et de survie, avec des rôles rapportés dans le contrôle, dépendant de la phosphorylation, de programmes transcriptionnels et de la dynamique du cytosquelette. Par son activité kinase, DRAK1 peut influencer des processus tels que l’intégrité mitochondriale, la progression du cycle cellulaire et les réponses cellulaires à des signaux génotoxiques ou inflammatoires. Une expression altérée de STK17A/DRAK1 a été observée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier l’apoptose dérégulée et la signalisation dans des modèles cellulaires humains.

DRAK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STK17A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DRAK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STK17A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STK17A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DRAK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STK17A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DRAK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DRAK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STK17A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.