Plasmide Double Nickase (m) DR5: sc-423438-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DR5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DR5 Double Nickase (m) et le plasmide DR5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tnfrsf10b. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DR5 Antibody (7F4-F8-G11): sc-517559
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DR5 | sc-423438-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Tnfrsf10b** code le récepteur de mort 5 (**DR5**), un membre de la superfamille des récepteurs du TNF qui se lie à **TRAIL** et déclenche l’apoptose extrinsèque via la trimérisation du récepteur, le recrutement de **FADD** et l’activation de la **caspase‑8**. La signalisation de DR5 peut converger avec l’amplification mitochondriale via **BID** et la **caspase‑9**, tout en activant également les voies **NF‑κB** et **MAPK**, qui modulent l’expression de gènes inflammatoires et les réponses au stress. La régulation de l’expression et du trafic de DR5 façonne la sensibilité à la signalisation des récepteurs de mort et contribue aux décisions de destinée cellulaire lors de la surveillance immunitaire et de l’homéostasie tissulaire. Une activité altérée de la voie DR5 est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, de la régulation immunitaire et de la résistance aux signaux apoptotiques dans des modèles de maladie.
DR5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tnfrsf10b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tnfrsf10b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tnfrsf10b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tnfrsf10b.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.