DPH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409607

Übersicht

DPH2 kodiert ein essenzielles Enzym des Diphthamid-Biosynthesewegs, das ein konserviertes Histidin am eukaryotischen Translations-Elongationsfaktor 2 (EEF2) modifiziert. Diese posttranslationale Modifikation unterstützt die Genauigkeit der Translation und beeinflusst zelluläre Antworten auf ribosomenzielenden Stress, wodurch die DPH2-Aktivität mit der zentralen Kontrolle der Proteinsynthese verknüpft ist. Störungen von Komponenten des Diphthamidwegs können die Proteostase und Stresssignalwege verändern, was DPH2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen der Translationsregulation macht. Da Diphthamid an EEF2 zudem ein Determinant der Empfindlichkeit gegenüber bestimmten bakteriellen Toxinen ist, bietet DPH2 einen gut zugänglichen Einstiegspunkt zur Untersuchung von Wirt–Erreger-Interaktionen und der Toxinbiologie in menschlichen Zellen.

Das DPH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DPH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DPH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DPH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DPH2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DPH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DPH2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DPH2-Exone abzielen, die für die DPH2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DPH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DPH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DPH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DPH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DPH2 HDR-Plasmid (h) und DPH2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DPH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DPH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.