Plasmide CRISPR d'Activation (h) DPF2: sc-404801-ACT

DPF2 (également connu sous le nom de REQU) code une protéine à doigts de zinc qui agit comme lecteur épigénétique au sein de complexes de remodelage de la chromatine dépendants de l’ATP, notamment SWI/SNF (BAF/PBAF). Grâce à ses doigts PHD, DPF2 reconnaît les modifications des queues d’histones et contribue à coordonner des programmes de remodelage des nucléosomes qui influencent le contrôle transcriptionnel, la spécification des lignages et l’expression génique en réponse à des stimuli. DPF2 a été associé à la régulation de la transcription liée à NF-κB ainsi qu’à un contrôle plus large, fondé sur la chromatine, de la prolifération et de la différenciation cellulaires. Une activité dérégulée de la voie SWI/SNF et une altération de la fonction de lecteur de chromatine impliquant DPF2 constituent des thèmes récurrents dans la biologie des cancers et des maladies inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des circuits transcriptionnels.

DPF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DPF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DPF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DPF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DPF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DPF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DPF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DPF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DPF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DPF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.