Plasmide CRISPR/Cas9 KO DPEP1 (h): sc-407451

Présentation

DPEP1 (dipeptidase 1) code une métalloprotéase au zinc ancrée à la membrane, localisée principalement à la surface apicale des cellules épithéliales, où elle hydrolyse divers dipeptides ainsi que des métabolites conjugués au glutathion. Par son activité enzymatique, DPEP1 contribue au renouvellement des peptides et au métabolisme des xénobiotiques, en s’inscrivant à l’interface des processus de détoxification dépendants du glutathion et des fonctions de transport épithélial. Des modifications d’expression de DPEP1 ont été rapportées dans plusieurs cancers d’origine épithéliale ainsi que dans des contextes inflammatoires, reliant cette enzyme au remodelage du microenvironnement péricellulaire et à une prise en charge métabolique altérée. En tant qu’ectoenzyme dotée de motifs catalytiques bien définis, DPEP1 constitue un point d’entrée pertinent pour étudier la biologie des protéases membranaires, les réponses au stress métabolique et les états de différenciation épithéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DPEP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DPEP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DPEP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DPEP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DPEP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DPEP1 pour l'étude de la signalisation de DPEP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DPEP1 essentiels à la fonction de DPEP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DPEP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DPEP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DPEP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DPEP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DPEP1 plasmide HDR (h) et le DPEP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DPEP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DPEP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.