Plasmide Double Nickase (h) DPAGT1: sc-406355-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DPAGT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DPAGT1 Double Nickase (h) et le plasmide DPAGT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DPAGT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DPAGT1 | sc-406355-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DPAGT1 | sc-406355-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DPAGT1 code la dolichyl‑phosphate N‑acétylglucosamine phosphotransférase 1, une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui catalyse la première étape engagée de la N‑glycosylation en transférant le N‑acétylglucosamine‑1‑phosphate sur le dolichol phosphate. Cette activité initie la biosynthèse des oligosaccharides liés aux lipides et soutient le repliement co‑traductionnel des protéines ainsi que le contrôle qualité au sein du RE, en s’intégrant aux voies de l’homéostasie du RE et de la protéostasie. La perturbation de la glycosylation dépendante de DPAGT1 altère la maturation de nombreuses protéines sécrétées et membranaires, influençant le trafic des récepteurs et la composition des glycoprotéines de surface cellulaire. Des variants pathogènes de DPAGT1 sont associés à des troubles congénitaux de la glycosylation et à des syndromes myasthéniques congénitaux liés à DPAGT1, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biogenèse des glycoprotéines et du fonctionnement du RE.
DPAGT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DPAGT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DPAGT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DPAGT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DPAGT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.