Plasmide Double Nickase (h) DP2: sc-404990-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DP2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DP2 Double Nickase (h) et le plasmide DP2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PTGDR2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DP2 Antibody (C-5): sc-271898
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DP2 | sc-404990-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DP2 | sc-404990-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTGDR2 code DP2 (également appelé CRTH2), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à la prostaglandine D2 et à des médiateurs lipidiques apparentés afin de réguler la chimiotaxie, l’activation et les programmes de cytokines dans les cellules immunitaires de type 2, notamment les lymphocytes Th2, les éosinophiles et les basophiles. La signalisation via DP2 mobilise des voies dépendantes de l’AMPc et des effecteurs en aval tels que les modules MAPK et PI3K, façonnant le recrutement des cellules inflammatoires et leurs fonctions effectrices aux surfaces muqueuses. Cet axe est fréquemment étudié dans le contexte de l’inflammation allergique et, plus largement, de la dérégulation immunitaire, où une signalisation prostaglandinique altérée peut influencer le trafic leucocytaire et le remodelage tissulaire. En tant que récepteur membranaire doté d’une signalisation bien définie induite par ses ligands, DP2 constitue un nœud exploitable pour disséquer la communication médiée par les eicosanoïdes entre les compartiments stromal et immunitaire.
DP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTGDR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTGDR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTGDR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTGDR2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.