Plasmide CRISPR d'Activation (h) DP2: sc-404990-ACT

Le gène humain **PTGDR2** code **DP2 (CRTH2)**, un récepteur couplé aux protéines G de la prostaglandine D2, enrichi dans des populations de cellules immunitaires de type 2, notamment les éosinophiles, les basophiles et les lymphocytes Th2. La signalisation de DP2 s’interface principalement avec des voies dépendantes de **Gi** afin de réguler la chimiotaxie, la mobilisation du calcium et des programmes de cytokines qui façonnent l’inflammation allergique et les réponses immunitaires des muqueuses. En modulant le trafic des leucocytes et leurs fonctions effectrices, l’activité de PTGDR2 est fréquemment étudiée dans le contexte de l’asthme, de la rhinite allergique, de la dermatite atopique et des états inflammatoires éosinophiliques. En tant que récepteur de surface cellulaire intégrant des signaux de médiateurs lipidiques, DP2 constitue un point d’entrée accessible pour étudier la transduction du signal des GPCR et les circuits de migration des cellules immunitaires.

DP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTGDR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTGDR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTGDR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTGDR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTGDR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.