Plasmide CRISPR d'Activation (h) DP-1: sc-403331-ACT

Le gène humain **TFDP1** code **DP-1**, un facteur de transcription spécifique de séquence qui forme des hétérodimères avec des membres de la famille **E2F** afin de réguler les gènes nécessaires à la transition **G1/S**, à la réplication de l’ADN et à la progression mitotique. Les complexes DP-1/E2F intègrent les signaux de la voie **RB** pour coordonner l’entrée dans le cycle cellulaire, le contrôle des points de contrôle et les programmes transcriptionnels associés à la prolifération. En contrôlant l’octroi des licences de réplication et l’expression des gènes de la phase S, l’activité de TFDP1 influence la stabilité du génome et les réponses cellulaires au stress oncogénique. Une signalisation TFDP1–E2F dérégulée est fréquemment impliquée dans la biologie des maladies liées à une prolifération accrue, ce qui fait de DP-1 un nœud d’étude utile pour analyser le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et le remodelage des réseaux transcriptionnels dans les cellules humaines.

DP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TFDP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TFDP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TFDP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TFDP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TFDP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.