Plasmide Double Nickase (h) DOT1L1: sc-403286-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DOT1L1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DOT1L1 Double Nickase (h) et le plasmide DOT1L1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DOT1L. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DOT1L1 Antibody (E-5): sc-374317
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DOT1L1 | sc-403286-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DOT1L1 | sc-403286-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DOT1L code pour DOT1L1, une méthyltransférase des lysines qui catalyse la mono-, la di- et la tri-méthylation de la Lys79 de l’histone H3, une marque de chromatine associée à une transcription active. En régulant des programmes d’expression génique, DOT1L influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la différenciation hématopoïétique et des réseaux transcriptionnels du développement. La méthylation H3K79 dépendante de DOT1L s’articule avec le contrôle épigénétique de l’élongation de l’ARN polymérase II et de l’accessibilité de la chromatine, façonnant des états transcriptionnels spécifiques de lignée. Une activité de DOT1L dérégulée et des profils altérés de méthylation de H3K79 sont impliqués dans des programmes transcriptionnels oncogéniques, notamment ceux associés aux leucémies avec réarrangements de MLL, soulignant sa pertinence pour la recherche en épigénétique et en biologie du cancer.
DOT1L1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DOT1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DOT1L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DOT1L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DOT1L.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.