Plasmide CRISPR d'Activation (h) DOR-1: sc-402195-ACT

OPRD1 code le récepteur opioïde delta humain (DOR-1), un GPCR de classe A qui se couple principalement aux protéines Gi/Go pour réguler l’activité de l’adénylate cyclase, la conductance des canaux ioniques et la signalisation MAPK. DOR-1 module la transmission synaptique et la communication neuro-immune via des voies en aval telles que cAMP/PKA et ERK1/2, influençant l’excitabilité neuronale et la libération de neurotransmetteurs. L’activation du récepteur affecte notamment la signalisation nociceptive, la réactivité au stress et les circuits liés à la récompense, et des altérations de l’expression ou de la signalisation d’OPRD1 ont été associées, dans des contextes de recherche biomédicale, à des phénotypes neuropsychiatriques et liés à la douleur. Ces caractéristiques font d’OPRD1 un nœud utile pour étudier la dynamique de la signalisation des GPCR, le trafic/la désensibilisation des récepteurs et le biais de voie dans des modèles cellulaires humains.

DOR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OPRD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DOR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OPRD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OPRD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DOR-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OPRD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DOR-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DOR-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de OPRD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.