Plasmide Double Nickase (h) DOC1: sc-407358-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DOC1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DOC1 Double Nickase (h) et le plasmide DOC1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FILIP1L. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DOC1 Antibody (D-2): sc-376472
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DOC1 | sc-407358-NIC | 20 µg | $410.00 |
FILIP1L (DOC1) code pour la protéine 1-like interagissant avec la filamine A, un régulateur associé au cytosquelette impliqué dans le remodelage de l’actine, le contrôle de la forme cellulaire et la signalisation dépendante de l’adhésion. DOC1 a été associé à la modulation de la migration et de la prolifération cellulaires via des voies qui coordonnent les interactions avec la matrice extracellulaire et la dynamique pilotée par les GTPases de la famille Rho. Une expression altérée de FILIP1L a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux et fait l’objet d’études en lien avec l’invasion, des phénotypes associés aux métastases et des programmes transcriptionnels répondant au stress. Ces caractéristiques font de DOC1 un nœud utile pour étudier comment l’organisation du cytosquelette s’intègre au contrôle de la croissance et de la motilité dans les cellules humaines.
DOC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FILIP1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FILIP1L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FILIP1L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FILIP1L.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.