Plasmide Double Nickase (h) Dnmt3b: sc-400332-NIC

DNMT3B code Dnmt3b, une méthyltransférase de novo de l'ADN qui établit les profils de méthylation des sites CpG au cours du développement et contribue à la régulation épigénétique à long terme de l'expression des gènes. Dnmt3b agit au sein de complexes associés à la chromatine pour façonner des programmes transcriptionnels, influencer l'empreinte génomique et aider à maintenir la stabilité du génome en modulant la méthylation des éléments répétitifs. Son activité s'articule avec le maintien de la méthylation couplé à la réplication de l'ADN et avec des voies épigénétiques plus larges contrôlant la spécification des lignages et l'identité cellulaire. Une méthylation dépendante de DNMT3B dérégulée est associée à une méthylation aberrante des promoteurs et à une instabilité épigénomique observées dans de multiples états cellulaires pertinents pour les maladies.

Dnmt3b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNMT3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNMT3B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNMT3B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNMT3B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.