Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) Dnmt2: sc-402709-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Dnmt2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Dnmt2 Double Nickase (h) et le plasmide Dnmt2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRDMT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Dnmt2 Antibody (D-9): sc-365001
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Dnmt2 | sc-402709-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Dnmt2 | sc-402709-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRDMT1 code Dnmt2, une méthyltransférase ARN cytosine-5 évolutivement conservée qui modifie principalement des ARNt spécifiques (p. ex., m5C sur l’ARNt Asp-GTC) plutôt que l’ADN génomique. Cette activité contribue à la stabilité des ARNt, à la fidélité de la traduction et à l’adaptation cellulaire au stress, reliant TRDMT1 à la régulation épigénétique de l’ARN et à la protéostasie. La méthylation des ARNt médiée par Dnmt2 a été associée au contrôle de la biogenèse des petits ARN et à des voies de réponse au stress qui influencent la survie et la différenciation cellulaires. Des altérations de la fonction ou de l’expression de TRDMT1 ont été rapportées dans plusieurs contextes de cancer ainsi que dans des modèles de dérégulation neurodéveloppementale et métabolique, ce qui motive des études mécanistiques sur la méthylation de l’ARN dans des phénotypes pertinents pour les maladies.
Dnmt2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRDMT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRDMT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRDMT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRDMT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.