Plasmide Double Nickase (h) Dnmt1: sc-400272-NIC

DNMT1 code la DNA (cytosine-5)-méthyltransférase 1 (Dnmt1), la principale méthyltransférase de maintenance qui copie les profils de méthylation des CpG lors de la réplication de l'ADN et contribue à préserver l'identité épigénétique des cellules. Dnmt1 agit dans le cadre de la régulation de la chromatine couplée à la réplication, en interagissant avec des facteurs tels que UHRF1 et PCNA afin de cibler l'ADN hémiméthylé et de coordonner la méthylation avec la dynamique des nucléosomes. En régulant l'empreinte génomique, l'inactivation du chromosome X et le silençage des transposons, DNMT1 influence la stabilité du génome, la spécification des lignages et les programmes transcriptionnels. Une activité dérégulée de DNMT1 et des paysages de méthylation de l'ADN altérés sont largement associés à un silençage génique aberrant et à des états de chromatine anormaux observés dans de nombreux cancers ainsi que dans des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs.

Dnmt1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNMT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNMT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNMT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNMT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.