Plásmido Doble Nickase (h) Dnmt1: sc-400272-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Dnmt1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dnmt1 (h) y el plásmido de doble nickasa Dnmt1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DNMT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dnmt1 Anticuerpo (H-12): sc-271729
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Dnmt1 | sc-400272-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Dnmt1 | sc-400272-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNMT1 codifica la ADN (citosina-5)-metiltransferasa 1 (Dnmt1), la principal metiltransferasa de mantenimiento que copia los patrones de metilación CpG durante la replicación del ADN y ayuda a preservar la identidad epigenética celular. Dnmt1 actúa en el contexto de la regulación de la cromatina acoplada a la replicación, interactuando con factores como UHRF1 y PCNA para dirigirse al ADN hemimetilado y coordinar la metilación con la dinámica de los nucleosomas. Mediante la regulación de la impronta genómica, la inactivación del cromosoma X y el silenciamiento de transposones, DNMT1 influye en la estabilidad del genoma, la especificación de linaje y los programas transcripcionales. La actividad desregulada de DNMT1 y los paisajes de metilación del ADN se asocian de manera amplia con el silenciamiento génico aberrante y con estados de cromatina alterados observados en diversos tipos de cáncer y en contextos neurodeliberamentales y neurodegenerativos.
Dnmt1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNMT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNMT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNMT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNMT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.