Plasmide CRISPR d'Activation (h) DnaJC3: sc-405100-ACT

DNAJC3 code DnaJC3, un co‑chaperon Hsp40 associé au réticulum endoplasmique, qui module la protéostasie en interagissant avec BiP/GRP78 et en atténuant la signalisation médiée par PERK lors de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En reliant l’activité des chaperonnes à la détection du stress du RE, DnaJC3 contribue à réguler le contrôle de la traduction, la capacité de repliement des protéines et la récupération après un stress protéotoxique, avec des effets en aval sur l’apoptose et la signalisation inflammatoire. La dérégulation des voies de stress du RE impliquant DnaJC3 a été associée à une vulnérabilité cellulaire dans des contextes métaboliques et neurodégénératifs, où une activation chronique de l’UPR peut altérer la fonction sécrétoire et l’homéostasie mitochondriale. En tant que nœud du contrôle qualité du RE, DnaJC3 est pertinent pour des études mécanistiques sur l’adaptation au stress, le remodelage du protéome et les décisions de destinée cellulaire en conditions de stress nutritionnel ou oxydatif.

DnaJC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DNAJC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DnaJC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DNAJC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DNAJC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DnaJC3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DNAJC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DnaJC3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DnaJC3 dans les cellules tumorales présentant une expression de DNAJC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.