Plasmide CRISPR d'Activation (h) DnaJB6: sc-404227-ACT

DNAJB6 code le co‑chaperon DnaJB6 de la famille Hsp40, une protéine à domaine J qui coopère avec Hsp70 pour réguler le repliement des protéines, leur triage et leur dégradation. DnaJB6 est enrichie dans des voies contrôlant la protéostasie, notamment la suppression de l’agrégation amyloïdogène, la modulation de l’autophagie et la coordination du contrôle qualité ubiquitine–protéasome en conditions de stress cellulaire. Par ces fonctions, DNAJB6 influence l’organisation du cytosquelette et les programmes myogéniques, et est associée à des troubles caractérisés par un mauvais repliement protéique et une dégénérescence musculaire, dont la dystrophie musculaire des ceintures. Une activité altérée de DNAJB6 est également étudiée dans le contexte de l’adaptation au stress cellulaire et de l’instabilité du protéome, avec des implications pour la recherche en neurodégénérescence et en biologie du cancer.

DnaJB6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DNAJB6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DnaJB6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DNAJB6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DNAJB6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DnaJB6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DNAJB6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DnaJB6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DnaJB6 dans les cellules tumorales présentant une expression de DNAJB6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.