Plásmido CRISPR de Activación (h) DnaJB4: sc-403159-ACT

El ADN humano DNAJB4 codifica DnaJB4, un cochaperón de dominio J de la familia HSP40 que regula la actividad ATPasa de HSP70 para favorecer el plegamiento y repliegamiento de proteínas cliente, así como su clasificación para la degradación. Al participar en redes de proteostasis, DnaJB4 contribuye al control de calidad citosólico y a respuestas adaptativas al estrés, influyendo en el manejo de proteínas mal plegadas o propensas a agregarse. Estas funciones se entrecruzan con vías que controlan la homeostasis proteica, incluida la autofagia asistida por chaperonas y mecanismos de eliminación vinculados al proteasoma. La desregulación de los sistemas de chaperonas es relevante en trastornos caracterizados por una proteostasis alterada, como la neurodegeneración y las miopatías, lo que convierte a DNAJB4 en un nodo útil para estudios mecanísticos del estrés celular y el control de calidad proteico.

DnaJB4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DNAJB4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DnaJB4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DNAJB4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DNAJB4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DnaJB4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DNAJB4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DnaJB4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DnaJB4 en células tumorales con expresión de DNAJB4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.