Plasmide Double Nickase (h) DNAH17: sc-409722-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DNAH17 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNAH17 Double Nickase (h) et le plasmide DNAH17 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DNAH17. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) DNAH17 | sc-409722-NIC | 20 µg | $410.00 |
DNAH17 code la chaîne lourde 17 de la dynéine axonémale, une ATPase motrice dépendante des microtubules qui contribue à la structure et à la motilité des cils et des flagelles. En tant que composant de la machinerie de dynéine axonémale, DNAH17 soutient le glissement des doublets de microtubules entraîné par l’ATP, à l’origine de l’organisation du battement ciliaire et de la propulsion du flagelle des spermatozoïdes. Cette protéine intervient dans l’organisation du cytosquelette et dans des voies liées à la motilité, notamment l’assemblage de l’axonème et les processus de transport ciliaire qui coordonnent mouvement et signalisation. Des perturbations génétiques des dynéines axonémales, dont DNAH17, sont associées à des phénotypes d’infertilité masculine tels que l’asthénozoospermie, ainsi qu’à des défauts plus larges de type ciliopathie affectant la fonction des cils motiles.
DNAH17 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNAH17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNAH17. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNAH17. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNAH17.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.