Partículas Lentivirales de Activación (h) DNA pol θ: sc-407414-LAC

POLQ codifica la ADN polimerasa theta (ADN pol θ), una polimerasa de la familia A propensa a errores con un dominio N-terminal tipo helicasa que coordina la unión de extremos y una síntesis de ADN limitada en sitios de daño en el ADN. La ADN pol θ es un componente central de la unión de extremos mediada por polimerasa theta (TMEJ), una vía de reparación dependiente de microhomologías que resuelve roturas de doble cadena y favorece la estabilidad del genoma cuando la recombinación homóloga está comprometida. A través de su actividad en la unión de extremos alternativa, POLQ influye en la tolerancia al estrés replicativo, los reordenamientos cromosómicos y las firmas mutacionales asociadas a la inestabilidad genómica. La actividad desregulada de POLQ se estudia con frecuencia en el contexto de la reprogramación de la reparación del ADN asociada al cáncer y de mecanismos de resistencia al estrés genotóxico, lo que la hace relevante para la genómica funcional de las vías de respuesta al daño del ADN.

Las partículas de activación lentiviral DNA pol θ (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de POLQ en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DNA pol θ (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción POLQ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DNA pol θ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo POLQ y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.