Plasmide Double Nickase (m) DNA pol θ: sc-429582-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DNA pol θ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNA pol θ Double Nickase (m) et le plasmide DNA pol θ Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Polq. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DNA pol θ | sc-429582-NIC | 20 µg | $410.00 |
La Polq murine code la polymérase ADN thêta (POLθ), une polymérase de la famille A sujette aux erreurs, dotée d’une activité intrinsèque de type hélicase, qui soutient la jonction d’extrémités alternative lors de la réparation des cassures double brin de l’ADN. POLθ est un effecteur central de la jonction médiée par microhomologies (MMEJ), influençant la stabilité du génome, la tolérance au stress de réplication et la résolution des fourches de réplication bloquées ou effondrées. Son activité interfère fonctionnellement avec la recombinaison homologue et la jonction d’extrémités non homologues classique, façonnant les issues mutationnelles de la réparation des dommages à l’ADN. Une réparation dépendante de POLθ dérégulée a été associée à une augmentation des phénotypes d’instabilité génomique, fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans des systèmes modèles de défauts de réparation de l’ADN.
DNA pol θ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Polq dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Polq. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Polq. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Polq.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.