Plasmide CRISPR d'Activation (h) DNA pol ν: sc-406518-ACT

POLN code la polymérase ADN ν (pol ν), une polymérase de la famille A impliquée dans la tolérance aux dommages de l’ADN et le maintien du génome via la synthèse translésionnelle de l’ADN et des étapes de synthèse apparentées associées à la réparation. L’activité de la pol ν a été reliée au traitement de lésions qui bloquent les polymérases réplicatives, influençant ainsi la progression de la fourche de réplication et l’équilibre entre des issues de réparation de l’ADN fautives et fidèles. Dans le cadre de voies plus larges de réparation de l’ADN et de réponse au stress réplicatif, POLN contribue au maintien de la stabilité chromosomique en conditions de stress génotoxique. Une expression ou une fonction dérégulée de POLN a été associée à la mutagenèse et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour des études mécanistiques des défauts de réparation de l’ADN associés au cancer.

DNA pol ν Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POLN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DNA pol ν Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POLN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POLN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DNA pol ν. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POLN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DNA pol ν au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DNA pol ν dans les cellules tumorales présentant une expression de POLN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.