DNA pol γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422341

Descripción general

Polg codifica la polimerasa de ADN gamma, la principal polimerasa replicativa del ADN mitocondrial en células de ratón, y es necesaria para la replicación del ADNmt, su reparación y el mantenimiento de la integridad del genoma mitocondrial. La polimerasa de ADN γ actúa en conjunto con componentes del nucleoide mitocondrial y de la reparación por escisión de bases para sostener la fosforilación oxidativa, preservando el número de copias y la fidelidad del ADNmt. La alteración de Polg perturba la biogénesis mitocondrial, aumenta la carga de mutaciones del ADNmt y puede desencadenar remodelación metabólica y señalización de estrés vinculadas a una homeostasis redox alterada. Polg se estudia ampliamente en contextos de disfunción mitocondrial, incluidas la neurodegeneración, la miopatía y fenotipos asociados al envejecimiento impulsados por una estabilidad comprometida del genoma mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Polg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Polg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Polg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DNA pol γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Polg para la investigación de la señalización de DNA pol γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Polg críticos para la función de DNA pol γ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Polg para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DNA pol γ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DNA pol γ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Polg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DNA pol γ (m) y el plásmido HDR DNA pol γ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Polg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Polg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.