Plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ (m): sc-422341
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- DNA pol γ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique DNA pol γ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DNA pol γ Antibody (G-6): sc-390634
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ (m) | sc-422341 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Polg code pour l’ADN polymérase gamma, la principale polymérase réplicative de l’ADN mitochondrial dans les cellules de souris, et est indispensable à la réplication de l’ADNmt, à sa réparation et au maintien de l’intégrité du génome mitochondrial. L’ADN polymérase γ agit de concert avec les composants du nucléoïde mitochondrial et de la réparation par excision de bases afin de soutenir la phosphorylation oxydative en préservant le nombre de copies et la fidélité de l’ADNmt. La perturbation de Polg altère la biogenèse mitochondriale, augmente la charge mutationnelle de l’ADNmt et peut déclencher un remodelage métabolique ainsi que des voies de signalisation du stress liées à une homéostasie rédox modifiée. Polg est largement étudié dans des contextes de dysfonction mitochondriale, notamment la neurodégénérescence, les myopathies et des phénotypes associés au vieillissement, dus à une stabilité compromise du génome mitochondrial.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Polg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Polg, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Polg à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DNA pol γ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Polg pour l'étude de la signalisation de DNA pol γ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Polg essentiels à la fonction de DNA pol γ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Polg pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le DNA pol γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DNA pol γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Polg. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le DNA pol γ plasmide HDR (m) et le DNA pol γ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Polg pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Polg définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.