Plasmide Double Nickase (h) DNA pol β: sc-402861-NIC

POLB code l’ADN polymérase bêta (ADN pol β), une enzyme clé de la voie de réparation par excision de base (BER), qui comble les brèches d’un seul nucléotide et traite les intermédiaires 5′-désoxyribose phosphate lors de la synthèse de réparation. Grâce à son action coordonnée avec XRCC1, la ligase III de l’ADN et les ADN glycosylases, l’ADN pol β contribue au maintien de l’intégrité du génome après des dommages oxydatifs, des alkylations et des pertes spontanées de bases. Une activité ou une expression altérée de POLB a été associée à une augmentation de la mutagenèse et à une instabilité chromosomique, reliant cette voie à des mécanismes impliqués dans la biologie du cancer et le déclin génomique lié à l’âge. En tant que facteur central de la BER, l’ADN pol β est fréquemment étudiée pour son influence sur la signalisation des dommages à l’ADN, les réponses au stress de réplication et la sensibilité cellulaire aux agents génotoxiques.

DNA pol β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POLB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POLB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POLB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POLB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.