DNA pol β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422336

Descripción general

Polb codifica la ADN polimerasa β, una enzima central de la vía de reparación por escisión de bases (BER) que rellena pequeños huecos en el ADN tras la eliminación de bases dañadas y procesa intermediarios de 5′-desoxirribosa fosfato. Al coordinarse con XRCC1, la ADN ligasa III y otros factores de la BER, la ADN polimerasa β ayuda a mantener la estabilidad del genoma y limita la acumulación de lesiones inducidas por oxidación y alquilación. La alteración o desregulación de los componentes de la BER, incluida la polimerasa β, se asocia con una mayor carga mutacional, señalización deficiente del daño en el ADN y respuestas celulares al estrés alteradas. Estas funciones convierten a Polb en un objetivo relevante para estudiar la capacidad de reparación del ADN, la sensibilidad a agentes genotóxicos y los mecanismos que vinculan los defectos de reparación con la inestabilidad genómica asociada a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DNA pol β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Polb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Polb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Polb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DNA pol β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Polb para la investigación de la señalización de DNA pol β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Polb críticos para la función de DNA pol β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Polb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DNA pol β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DNA pol β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Polb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DNA pol β (m) y el plásmido HDR DNA pol β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Polb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Polb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.