Plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol β (m): sc-422336

Présentation

Polb code pour l’ADN polymérase β, une enzyme clé de la voie de réparation par excision de base (BER), qui comble de courts intervalles d’ADN après l’élimination de bases endommagées et traite les intermédiaires 5′-désoxyribose phosphate. En coordination avec XRCC1, l’ADN ligase III et d’autres facteurs de la BER, l’ADN polymérase β contribue au maintien de la stabilité du génome et limite l’accumulation de lésions induites par l’oxydation et l’alkylation. La perturbation ou la dérégulation des composants de la BER, dont la polymérase β, est associée à une augmentation de la charge mutationnelle, à une altération de la signalisation des dommages à l’ADN et à des réponses au stress cellulaire modifiées. Ces fonctions font de Polb une cible pertinente pour étudier la capacité de réparation de l’ADN, la sensibilité aux agents génotoxiques et les mécanismes reliant les défauts de réparation à une instabilité génomique associée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Polb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Polb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Polb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DNA pol β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Polb pour l'étude de la signalisation de DNA pol β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Polb essentiels à la fonction de DNA pol β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Polb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DNA pol β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DNA pol β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Polb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DNA pol β plasmide HDR (m) et le DNA pol β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Polb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Polb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.