Plasmide Double Nickase (h) DNA Ligase III: sc-402841-NIC

LIG3 code la ligase III de l’ADN humaine, une ligase ATP-dépendante qui scelle les cassures simple brin lors de la réparation par excision de base et coordonne la réparation des dommages oxydatifs de l’ADN via des interactions avec XRCC1. La ligase III contribue également à la jonction d’extrémités alternative et participe à des processus de maintien du génome qui protègent les fourches de réplication et préservent la stabilité chromosomique. Son isoforme mitochondriale soutient la réparation et l’intégrité de l’ADN mitochondrial, reliant la fonction de LIG3 à la bioénergétique cellulaire et aux réponses au stress. Une dérégulation ou une perte d’activité de LIG3 est associée à une augmentation de la signalisation des dommages à l’ADN, à une charge mutationnelle accrue et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et la recherche sur les maladies neurodégénératives.

DNA Ligase III Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LIG3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LIG3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LIG3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LIG3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.