Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DMRT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402856-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DMRT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DMRT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DMRT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DMRT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DMRT1: sc-377167
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DMRT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DMRT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DMRT1 kodiert einen DM-Domänen-Transkriptionsfaktor, der an sequenzspezifische DNA-Elemente bindet und so Programme der Geschlechtsbestimmung und -differenzierung reguliert, mit wichtigen Funktionen in der Entwicklung von Sertoli- und Keimzellen. In menschlichen Geweben ist es an transkriptionellen Netzwerken beteiligt, die das gonadale Schicksal, die Meiose und die Aufrechterhaltung der Hodenidentität durch koordinierte Regulation nachgeschalteter Entwicklungsgenes steuern. Eine veränderte DMRT1-Dosierung oder fehlregulierte Expression wird mit Störungen der Geschlechtsentwicklung und beeinträchtigter Spermatogenese in Verbindung gebracht, was die Empfindlichkeit gegenüber einem ausbalancierten Genregulationsgleichgewicht während der Gonadenentwicklung widerspiegelt. Da es sich um einen linienbestimmenden Regulator handelt, wird DMRT1 häufig in Modellen der reproduktiven Entwicklung, von Zellschicksalsentscheidungen und der Transkriptionskontrolle untersucht.
DMRT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DMRT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DMRT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DMRT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DMRT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.