Plasmide Double Nickase (h) DMRT1: sc-402856-NIC

DMRT1 code un facteur de transcription à domaine DM qui se fixe à des éléments d’ADN spécifiques de séquence afin de réguler les programmes de détermination et de différenciation sexuelles, avec des rôles majeurs dans le développement des cellules de Sertoli et des cellules germinales. Dans les tissus humains, il participe à des réseaux transcriptionnels contrôlant le destin gonadique, la méiose et le maintien de l’identité testiculaire grâce à une régulation coordonnée de gènes du développement situés en aval. Une altération de la dose de DMRT1 ou une expression dérégulée est associée à des troubles du développement sexuel et à une spermatogenèse altérée, ce qui reflète sa sensibilité à l’équilibre de la régulation génique au cours de la gonadogenèse. En tant que régulateur définissant une lignée cellulaire, DMRT1 est fréquemment étudié dans des modèles de développement reproducteur, de décisions de destin cellulaire et de contrôle transcriptionnel.

DMRT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DMRT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DMRT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DMRT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DMRT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.