Plasmide CRISPR d'Activation (m) DMRT1: sc-424507-ACT

Dmrt1 code pour DMRT1, un facteur de transcription conservé à domaine DM, indispensable à la détermination du sexe mâle et à la différenciation postnatale du testicule chez la souris. DMRT1 régule les programmes d’expression génique des cellules de Sertoli et des cellules germinales, qui maintiennent le destin des spermatogonies, empêchent une entrée méiotique inappropriée et préservent l’identité testiculaire grâce à un contrôle transcriptionnel spécifique des stades. Il s’interface avec des réseaux de signalisation du développement et une régulation médiée par la chromatine, qui coordonnent la mise en place des gonades, la progression du cycle cellulaire et l’engagement de lignée. Une perturbation ou une dérégulation de Dmrt1 est associée à des troubles du développement sexuel et à une spermatogenèse altérée, ce qui en fait une cible majeure pour l’étude de la biologie de la reproduction et des voies liées aux tumeurs gonadiques dans des modèles expérimentaux.

DMRT1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Dmrt1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DMRT1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Dmrt1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Dmrt1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DMRT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Dmrt1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DMRT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DMRT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Dmrt1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.