Plasmide CRISPR d'Activation (h) DMP-1: sc-402197-ACT

DMP1 code la phosphoprotéine acide de la matrice dentinaire 1 (DMP-1), une phosphoprotéine de la matrice extracellulaire qui régule le dépôt minéral et l’homéostasie du phosphate au cours du développement squelettique et dentaire. DMP-1 est clivée en fragments fonctionnels qui influencent la maturation des ostéocytes, la dentinogenèse et l’organisation de l’hydroxyapatite via des interactions avec le calcium/le phosphate et des composants de la matrice. Dans l’os, DMP-1 est associée à des réseaux de signalisation pilotés par les ostéocytes, qui couplent la minéralisation de la matrice aux voies de régulation du phosphate, notamment par la modulation de processus liés à FGF23. Des altérations de l’expression ou de la fonction de DMP1 sont associées à des troubles de la densité minérale osseuse et de la formation de la dentine, ce qui souligne sa pertinence pour les études de la biologie de la minéralisation et des phénotypes squelettiques héréditaires.

DMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DMP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DMP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DMP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DMP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DMP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DMP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DMP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DMP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.