Plasmide CRISPR d'Activation (m) DLK1: sc-420009-ACT

Delta-like non-canonical Notch ligand 1 (Dlk1/DLK1) est une protéine transmembranaire soumise à empreinte parentale et régulée au cours du développement, pouvant être transformée par protéolyse en une forme soluble et agissant comme modulateur de la signalisation cellule–cellule. Dans les tissus murins, Dlk1 est étroitement liée au contrôle de l’engagement des lignages et du remodelage tissulaire dans des contextes mésenchymateux et neuroendocriniens, en influençant les programmes de différenciation adipogénique et ostéogénique et en contribuant au maintien des cellules souches/progénitrices. DLK1 interfère avec des voies de signalisation apparentées à Notch et associées à MAPK/ERK, et est fréquemment étudiée dans le cadre plus large de la régulation des réseaux de gènes soumis à empreinte parentale et des voies endocrines du développement. Une expression dérégulée de Dlk1 a été associée à des phénotypes de croissance et de différenciation altérés et est souvent examinée dans des modèles de dysfonctionnement métabolique, de fibrose et d’anomalies du développement.

DLK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Dlk1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DLK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Dlk1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Dlk1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DLK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Dlk1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DLK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DLK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Dlk1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.