Plasmide CRISPR d'Activation (h) DLK1: sc-400798-ACT

DLK1 (delta-like 1 homolog) code un ligand transmembranaire et soluble de la famille non canonique Delta/Notch, qui module la signalisation intercellulaire au cours du développement et du remodelage tissulaire. DLK1 influence le comportement des cellules souches et progénitrices, la différenciation adipogénique et les programmes de lignée endocrinienne, et est fréquemment associé au contrôle de l’empreinte génomique au locus DLK1-DIO3. Par des interactions avec des sorties de signalisation associées à Notch et des voies de facteurs de croissance, DLK1 peut façonner les états de prolifération et de différenciation dans de multiples types cellulaires. Une expression dérégulée de DLK1 a été associée à des phénotypes métaboliques altérés et à des anomalies du développement, et DLK1 est souvent étudié dans le contexte de la plasticité des cellules tumorales et de la progression de lignée.

DLK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DLK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DLK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DLK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DLK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DLK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DLK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DLK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DLK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DLK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.