Particules Lentivirales d'Activation (h) DLD: sc-403207-LAC

Le gène humain DLD code la dihydrolipoamide déshydrogénase, une oxydoréductase mitochondriale dépendante du FAD qui régénère la lipoamide oxydée afin de maintenir le cycle catalytique de plusieurs complexes de déshydrogénases. En tant que sous-unité E3 commune à la pyruvate déshydrogénase, à l’α‑cétoglutarate déshydrogénase et à la déshydrogénase des α‑cétoacides à chaîne ramifiée, DLD relie l’entrée des carbones issus de la glycolyse et le flux du cycle de l’acide citrique (TCA) au catabolisme des acides aminés et à l’homéostasie rédox via la production de NADH. L’activité de DLD contribue au métabolisme énergétique mitochondrial et à l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène, ce qui la connecte à des voies impliquées dans les réponses au stress métabolique. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de DLD ont été associées à des troubles métaboliques mitochondriaux et à des modifications de la bioénergétique cellulaire, soutenant son utilisation dans des études sur les phénotypes neurométaboliques et les mécanismes de dysfonction mitochondriale.

Les particules d'activation lentivirales DLD (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DLD dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DLD (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DLD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DLD. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DLD ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.