Plasmide CRISPR d'Activation (m) Dkk-1: sc-420004-ACT

Le gène murin Dkk1 code Dickkopf-1 (Dkk-1), un antagoniste sécrété de la signalisation canonique Wnt/β-caténine qui se lie à LRP5/6 et limite les programmes transcriptionnels induits par Wnt. En modulant l’activité de Wnt, Dkk-1 influence la mise en place des structures embryonnaires, la différenciation des ostéoblastes et l’homéostasie osseuse, ainsi que le remodelage tissulaire. Une expression altérée de Dkk1 est associée à une dérégulation de l’activité de la voie Wnt observée dans des contextes tels que des phénotypes squelettiques, une signalisation liée à la fibrose et des interactions au sein du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer la voie. Dkk1 est également étudié pour ses effets sur le comportement des cellules souches/progénitrices et les interactions avec les réseaux inflammatoires et de facteurs de croissance.

Dkk-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Dkk1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dkk-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Dkk1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Dkk1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dkk-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Dkk1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dkk-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dkk-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Dkk1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.