Plasmide CRISPR d'Activation (h) DJ-1: sc-401006-ACT

Le gène humain **PARK7** code **DJ-1**, une protéine multifonctionnelle sensible à l’état redox qui contribue à la défense cellulaire contre le stress oxydatif et la protéotoxicité. DJ-1 influence l’homéostasie mitochondriale, la mise en tampon des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et la signalisation activée par le stress, et a été impliquée dans la régulation de programmes transcriptionnels ainsi que dans des activités de type chaperon soutenant le contrôle de la qualité des protéines. Une altération de la fonction de PARK7/DJ-1 est associée à la neurodégénérescence, en particulier à la maladie de Parkinson, ainsi qu’à des phénotypes plus larges d’adaptation au stress dans des tissus à forte activité métabolique. En tant que nœud reliant les réponses au stress oxydatif, la dynamique mitochondriale et l’homéostasie protéique, DJ-1 est largement étudiée dans des modèles de vulnérabilité neuronale et de résilience cellulaire.

DJ-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PARK7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DJ-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PARK7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PARK7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DJ-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PARK7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DJ-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DJ-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PARK7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.