Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dist1 (h): sc-406805

Présentation

RHBDF1 (Dist1) code un membre inactif de la famille des rhomboïdes, qui agit comme cofacteur régulateur du contrôle qualité dans le réticulum endoplasmique (RE) et de la signalisation des facteurs de croissance. Dist1 participe au contrôle du clivage (shedding) de l’ectodomaine dépendant d’ADAM17, influençant la libération des ligands de l’EGFR et l’activité en aval des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, ainsi que les réponses au stress cellulaire et la signalisation inflammatoire. Par ces mécanismes, RHBDF1 contribue à l’homéostasie épithéliale, à la survie cellulaire et aux programmes de migration. Une expression ou une activité dérégulée de RHBDF1 a été associée à une signalisation proliférative altérée et à des phénotypes pertinents pour des maladies dans des contextes cancéreux et inflammatoires, ce qui étaye son intérêt en tant que cible mécanistique pour des études de voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dist1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHBDF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHBDF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHBDF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dist1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHBDF1 pour l'étude de la signalisation de Dist1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHBDF1 essentiels à la fonction de Dist1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHBDF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dist1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dist1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHBDF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dist1 plasmide HDR (h) et le Dist1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHBDF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHBDF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.