Plasmide CRISPR d'Activation (h) DIS3L2: sc-405372-ACT

Le gène humain **DIS3L2** code une exoribonucléase cytoplasmique 3′–5′ qui participe à la surveillance et au renouvellement des ARN, avec un rôle marqué dans la dégradation de substrats ARN oligouridylés produits par l’ajout de queues médié par des TUTases. Par l’élimination sélective de pré-miARN aberrants et d’ARN structurés, DIS3L2 influence la biogenèse des petits ARN, la régulation génique post-transcriptionnelle et l’homéostasie cellulaire en situation de stress. L’activité de DIS3L2 s’interface avec des voies contrôlant la prolifération et la différenciation en modulant la stabilité des transcrits et les réseaux de contrôle qualité des ARN. Des altérations de la fonction de DIS3L2 ont été associées à des phénotypes développementaux et liés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier comment une dégradation des ARN dérégulée contribue à des programmes d’expression génique impliqués dans les maladies.

DIS3L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DIS3L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DIS3L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DIS3L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DIS3L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DIS3L2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DIS3L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DIS3L2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DIS3L2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DIS3L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.