Plasmide CRISPR d'Activation (h) DIP2C: sc-411642-ACT

La DIP2C humaine (disco-interacting protein 2 homolog C) est une protéine associée au noyau, impliquée dans la régulation de l’expression génique liée à la chromatine et dans le maintien des programmes d’identité cellulaire. Les fonctions rapportées relient les membres de la famille DIP2 au contrôle épigénétique, à des processus associés à la méthylation de l’ADN et à des réseaux transcriptionnels liés à la différenciation, qui façonnent la prolifération et l’engagement de lignée. Une expression altérée de DIP2C ainsi que des variations du nombre de copies ont été observées dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui étaye sa pertinence dans les états transcriptionnels dérégulés et le remodelage à l’échelle du génome des mécanismes de régulation. Ces caractéristiques font de DIP2C une cible utile pour étudier le contrôle transcriptionnel, les transitions d’état cellulaire et les circuits de régulation pertinents pour le cancer dans les cellules humaines.

DIP2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DIP2C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DIP2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DIP2C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DIP2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DIP2C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DIP2C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DIP2C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DIP2C dans les cellules tumorales présentant une expression de DIP2C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.