Plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO2 (h): sc-402262

Présentation

DIO2 code la déiodinase de type II des iodothyronines, une sélénoprotéine associée au réticulum endoplasmique qui catalyse la déiodation de l’anneau externe de la thyroxine (T4) en triiodothyronine (T3), l’hormone active. En contrôlant la disponibilité intracellulaire de T3, DIO2 façonne des programmes transcriptionnels dépendants des récepteurs des hormones thyroïdiennes, qui régulent le métabolisme énergétique, la thermogenèse, l’homéostasie des lipides et du glucose, ainsi que la différenciation selon les tissus. L’activité de DIO2 s’intègre à la biologie du sélénium et à l’équilibre redox, notamment via la synthèse des sélénoprotéines et les réponses au stress oxydant, qui influencent la stabilité et le renouvellement de l’enzyme. Des altérations de l’expression ou de la fonction de DIO2 ont été associées à des phénotypes métaboliques et à des physiopathologies sensibles aux hormones thyroïdiennes, ce qui soutient l’intérêt de son étude dans la régulation endocrinienne, les mécanismes liés à l’obésité et la signalisation thyroïdienne spécifique des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DIO2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DIO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DIO2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DIO2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DIO2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DIO2 pour l'étude de la signalisation de DIO2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DIO2 essentiels à la fonction de DIO2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DIO2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DIO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DIO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DIO2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DIO2 plasmide HDR (h) et le DIO2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DIO2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DIO2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.