Plasmide Double Nickase (h) DinB: sc-405052-NIC

Le gène humain **POLK** code la polymérase kappa (DinB), une polymérase de synthèse translésionnelle de la famille Y qui permet la réplication à travers des adduits volumineux de l’ADN et d’autres lésions qui, autrement, bloqueraient la polymérase réplicative. **POLK** intervient dans la tolérance aux dommages de l’ADN et le maintien de la progression de la fourche de réplication, en interagissant avec l’antigène nucléaire de prolifération cellulaire (PCNA) et en participant à des voies coordonnées par la signalisation du stress réplicatif médiée par ATR. Son activité de contournement des lésions influence les spectres mutationnels et la stabilité du génome, reliant la dérégulation de **POLK** à des réponses cellulaires modifiées au stress génotoxique et à une mutagenèse aberrante. **POLK** est donc étudié dans le cadre de l’équilibre des réseaux de réparation de l’ADN, de la biologie du stress réplicatif et des mécanismes qui façonnent l’accumulation des mutations somatiques.

DinB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POLK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POLK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POLK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POLK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.