Dicer Double Nickase Plasmid (h): sc-400365-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dicer Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dicer Double-Nickase-Plasmid (h) und Dicer Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DICER1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dicer: sc-136979
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dicer Double Nickase Plasmid (h) | sc-400365-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dicer Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400365-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DICER1 kodiert Dicer, eine RNase-III-Endonuklease, die für die Biogenese von microRNAs und siRNAs essenziell ist, indem sie Vorläufer-Haarnadelstrukturen zu etwa 21–23 nt langen kleinen RNAs prozessiert. Durch das Laden dieser kleinen RNAs in Argonaute-haltige RISC-Komplexe reguliert Dicer die posttranskriptionelle Genstilllegung und beeinflusst Signalwege, die Differenzierung, Proliferation und Stressantworten steuern. DICER1-abhängige Netzwerke kleiner RNAs wirken sich auf die Genomstabilität und die angeborene Immun-Signalgebung aus, indem sie die Aktivität repetitiver Elemente sowie Antworten auf DNA-Doppelstrangbrüche modulieren. Eine Fehlregulation oder Mutation von DICER1 stört die microRNA-Homöostase und steht in mehreren Krankheitskontexten mit veränderten Genexpressionsprogrammen in Verbindung, wodurch DICER1 ein wichtiges Ziel für mechanistische Studien zur RNA-Interferenz und zur Kontrolle des Transkriptoms darstellt.
Dicer Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DICER1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DICER1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DICER1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DICER1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.