Dia 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401929

Übersicht

DIAPH1 (Dia1) kodiert ein RhoA-reaktives Formin, das lineare Aktinfilamente nukleiert und verlängert und so den für Zellform, Adhäsion und gerichtete Migration erforderlichen Umbau des Zytoskeletts koordiniert. Dia1 ist in die Rho-GTPase-Signalübertragung eingebunden und arbeitet mit Profilin und anderen Aktin-Regulatoren zusammen, um die Bildung von Stressfasern, die Ausbildung von Filopodien und die Zytokinese zu unterstützen. Über seine Auswirkungen auf das Zusammenspiel von Aktin und Mikrotubuli sowie auf den Membrantransport trägt DIAPH1 zu Prozessen wie der Positionierung der Spindel und der Vesikeldynamik bei. Eine fehlregulierte DIAPH1-Aktivität wurde mit veränderter Mechanotransduktion in Verbindung gebracht und ist krankheitsrelevant, unter anderem bei erblich bedingtem Hörverlust sowie Thrombozyten- bzw. Zytoskelett-Phänotypen, was es zu einem nützlichen Ziel für funktionelle Studien in humanen Zellsystemen macht.

Das Dia 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DIAPH1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DIAPH1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DIAPH1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dia 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DIAPH1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dia 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DIAPH1-Exone abzielen, die für die Dia 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DIAPH1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dia 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dia 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DIAPH1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dia 1 HDR-Plasmid (h) und Dia 1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DIAPH1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DIAPH1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.