DHRS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411259

Übersicht

DHRS3 (Dehydrogenase/Reduktase 3) kodiert eine NADPH-abhängige kurzkettige Dehydrogenase/Reduktase, die die Reduktion von Retinaldehyd zu Retinol katalysiert und damit zur Regulation der intrazellulären Retinoid-Homöostase beiträgt. Indem DHRS3 die Verfügbarkeit von Retinal für die Oxidation zu Retinsäure begrenzt, moduliert es Retinsäure-Signalprogramme, die Differenzierung, embryonale Entwicklung, Epithelbiologie und metabolische Anpassung beeinflussen. Die Expression von DHRS3 reagiert auf Retinoide und ist über die Steuerung des Flusses reaktiver Aldehyde mit Retinol-Speicherung sowie oxidativem Stress assoziierten Prozessen verknüpft. Eine fehlregulierte Retinoidmetabolisierung und veränderte DHRS3-Aktivität wurden mit Entwicklungsanomalien und krebsassoziierten Veränderungen von Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht, was DHRS3 für mechanistische Studien retinoidgetriebener Phänotypen relevant macht.

Das DHRS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DHRS3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DHRS3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DHRS3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DHRS3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DHRS3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DHRS3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DHRS3-Exone abzielen, die für die DHRS3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DHRS3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DHRS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DHRS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DHRS3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DHRS3 HDR-Plasmid (h) und DHRS3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DHRS3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DHRS3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.