Plasmide Double Nickase (m) DHCR7: sc-419997-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DHCR7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DHCR7 Double Nickase (m) et le plasmide DHCR7 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dhcr7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DHCR7 | sc-419997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) DHCR7 | sc-419997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dhcr7 code la 7‑déhydrocholestérol réductase (DHCR7), une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la réduction terminale du 7‑déhydrocholestérol en cholestérol dans la branche de Kandutsch–Russell de la voie de biosynthèse du cholestérol. En contrôlant la disponibilité du cholestérol, DHCR7 influence la composition des microdomaines membranaires, la stéroïdogenèse et des processus de signalisation dépendants des lipides qui orientent la prolifération et la différenciation cellulaires. Une altération de l’activité de DHCR7 perturbe l’homéostasie des stérols avec accumulation de stérols précurseurs, modifiant la sensibilité au stress oxydatif et les réseaux de signalisation du développement. Dans les modèles murins, Dhcr7 est largement utilisé pour étudier comment un déséquilibre de la voie du cholestérol affecte des phénotypes neurodéveloppementaux, métaboliques et de trafic membranaire, pertinents pour la biologie des maladies génétiques liées aux stérols.
DHCR7 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dhcr7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dhcr7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dhcr7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dhcr7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.