Plasmide Double Nickase (h) DGUOK: sc-407916-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DGUOK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DGUOK Double Nickase (h) et le plasmide DGUOK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DGUOK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DGUOK Antibody (H-3): sc-376267
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DGUOK | sc-407916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DGUOK | sc-407916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La désoxyguanosine kinase (DGUOK) est une enzyme de la matrice mitochondriale qui phosphoryle la désoxyguanosine et la désoxyadénosine, fournissant des précurseurs de désoxyribonucléotides nécessaires à la réplication et à la réparation de l’ADN mitochondrial (ADNmt). En contribuant à maintenir des pools de dNTP équilibrés au sein des mitochondries, DGUOK aide à préserver le nombre de copies et l’intégrité de l’ADNmt, reliant le métabolisme de sauvetage des nucléotides à la capacité de phosphorylation oxydative et à la biogenèse mitochondriale. Une perturbation de l’activité de DGUOK est associée à une déplétion de l’ADNmt et à une altération de la fonction de la chaîne respiratoire, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur la maintenance mitochondriale, le métabolisme énergétique et les réponses cellulaires au stress. DGUOK humain est donc couramment étudié dans des modèles de dysfonctionnement mitochondrial et d’homéostasie des nucléotides.
DGUOK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DGUOK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DGUOK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DGUOK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DGUOK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.