Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) DGK-α: sc-403975-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DGK-α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DGK-α Double Nickase (h) et le plasmide DGK-α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DGKA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DGK-α Antibody (C-11): sc-271644
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DGK-α | sc-403975-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DGK-α | sc-403975-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La diacylglycérol kinase alpha (DGK-α), codée par le gène humain DGKA, phosphoryle le diacylglycérol afin de produire de l’acide phosphatidique, contrôlant ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation lipidique par seconds messagers. Par cette conversion du DAG en PA, DGK-α module la signalisation dépendante de la PKC, le métabolisme des phosphoinositides et des voies en aval telles que MAPK/ERK et PI3K/AKT, qui influencent la prolifération, la migration et la survie. L’activité de DGK-α façonne également le trafic membranaire et la dynamique du cytosquelette en régulant la composition lipidique locale au niveau des microdomaines de signalisation. Une expression dérégulée de DGKA ou une signalisation DGK-α altérée a été associée à des modifications de l’activation des cellules immunitaires et à des contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du remodelage des voies piloté par les kinases lipidiques.
DGK-α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DGKA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DGKA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DGKA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DGKA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.