Plasmide Double Nickase (h) DGAT1: sc-401735-NIC

DGAT1 code pour la diacylglycérol O‑acyltransférase 1, une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui catalyse l’étape terminale de la synthèse des triacylglycérols à partir du diacylglycérol et de l’acyl‑CoA. En contrôlant la formation des lipides neutres et la biogenèse des gouttelettes lipidiques, DGAT1 influence le stockage énergétique cellulaire, les réponses à la lipotoxicité et l’homéostasie des lipides membranaires, à l’interface du métabolisme des acides gras et des voies des glycérolipides. L’activité de DGAT1 est pertinente pour l’étude de la régulation métabolique dans les adipocytes, les hépatocytes et l’épithélium intestinal, où la gestion des triacylglycérols façonne l’absorption des nutriments et la signalisation lipidique. Des altérations de l’expression ou de la fonction de DGAT1 ont été étudiées dans des contextes tels que la dyslipidémie, la résistance à l’insuline, la stéatose hépatique et l’inflammation induite par les lipides.

DGAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DGAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DGAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DGAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DGAT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.