Plasmide CRISPR/Cas9 KO DET1 (h): sc-406735

Présentation

DET1 (de-etiolated homolog 1) code un régulateur nucléaire conservé qui agit comme échafaudage au sein de la machinerie E3 ubiquitine ligase CUL4–DDB1, contribuant à coordonner le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Par l’intermédiaire de ce complexe, DET1 participe au contrôle transcriptionnel et à des processus associés à la chromatine qui influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la protéostase. L’activité de DET1 s’inscrit à l’interface de programmes de signalisation régulés par l’ubiquitination, notamment des voies qui modulent l’expression génique liée à la prolifération et à l’adaptation au stress. Une dérégulation de la fonction de ligase à ubiquitine associée à DET1 a été liée à des altérations des réseaux transcriptionnels et à des phénotypes de stabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles caractérisés par un déséquilibre de la protéostase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DET1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DET1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DET1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DET1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DET1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DET1 pour l'étude de la signalisation de DET1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DET1 essentiels à la fonction de DET1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DET1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DET1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DET1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DET1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DET1 plasmide HDR (h) et le DET1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DET1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DET1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.