DET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406735
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DET1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DET1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DET1 Anticorpo (F-2): sc-514348
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406735 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
DET1 (homólogo 1 de-etiolado) codifica um regulador nuclear conservado que atua como uma plataforma (scaffold) no maquinário da ligase E3 de ubiquitina CUL4–DDB1, ajudando a coordenar a degradação de proteínas dependente de ubiquitina. Por meio desse complexo, a DET1 contribui para o controle transcricional e para processos associados à cromatina que influenciam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a proteostase. A atividade de DET1 se intersecciona com programas de sinalização regulados por ubiquitinação, incluindo vias que afetam a expressão gênica ligada à proliferação e à adaptação ao estresse. A desregulação da função da ligase de ubiquitina associada à DET1 tem sido relacionada a redes transcricionais alteradas e a fenótipos de estabilidade genômica relevantes para a biologia do câncer e outros distúrbios caracterizados por desequilíbrio de proteostase.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DET1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DET1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DET1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DET1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DET1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DET1 para a investigação da sinalização de DET1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DET1 críticos para a função DET1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DET1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DET1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DET1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DET1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DET1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DET1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DET1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.