Plasmide Double Nickase (h) desmoplakin I/II: sc-400818-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) desmoplakin I/II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide desmoplakin I/II Double Nickase (h) et le plasmide desmoplakin I/II Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DSP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: desmoplakin I/II Antibody (A-1): sc-390975
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) desmoplakin I/II | sc-400818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) desmoplakin I/II | sc-400818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DSP code pour la desmoplakine I/II, un composant central de la famille des plakines au sein des desmosomes, qui ancre les filaments intermédiaires aux plaques desmosomales afin de maintenir l’intégrité mécanique des épithéliums et du tissu cardiaque. En reliant les réseaux de kératines ou de desmine aux complexes desmogléine/desmocolline–plakoglobine–plakophiline, la desmoplakine soutient la stabilité des jonctions, l’organisation du cytosquelette et les voies de mécanotransduction qui coordonnent la résistance des tissus. Une altération de DSP perturbe l’assemblage des desmosomes et l’attache des filaments intermédiaires, entraînant des défauts d’adhérence cellule–cellule et une modification de la signalisation liée au stress. Le dysfonctionnement de DSP est associé à des maladies héréditaires et acquises caractérisées par une fragilité cutanée et des phénotypes de cardiomyopathie, ce qui en fait une cible clé pour l’étude de la biologie des jonctions et des mécanismes d’intégrité tissulaire.
desmoplakin I/II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DSP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DSP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DSP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DSP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.