Plasmide CRISPR/Cas9 KO desmoplakin I/II (h): sc-400818

Présentation

DSP code la desmoplakine I/II, un composant central de la famille des plakines au sein des desmosomes, qui ancre les filaments intermédiaires à des complexes jonctionnels basés sur les cadherines, soutenant ainsi le couplage mécanique entre cellules adjacentes. En reliant les assemblages desmogléine/desmocolline–plakoglobine/plakophiline aux réseaux de kératine ou de desmine, la desmoplakine contribue à coordonner l’intégrité des tissus épithéliaux et cardiaques et régule le remodelage jonctionnel au cours de la différenciation et des réponses au stress associées aux plaies. La perturbation de DSP altère l’organisation du cytosquelette, l’adhérence cellule–cellule et la signalisation mécanosensible, avec une pertinence établie pour des affections héréditaires et acquises touchant l’épiderme et le myocarde. Ces caractéristiques font de DSP un nœud d’étude utile pour explorer la stabilité des jonctions, le dialogue entre cytosquelette et jonctions, ainsi que les voies de remodelage induites par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO desmoplakin I/II (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DSP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DSP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DSP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine desmoplakin I/II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DSP pour l'étude de la signalisation de desmoplakin I/II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DSP essentiels à la fonction de desmoplakin I/II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DSP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le desmoplakin I/II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le desmoplakin I/II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DSP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le desmoplakin I/II plasmide HDR (h) et le desmoplakin I/II (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DSP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DSP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.