Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Desmin (h): sc-400248
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Desmin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Desmin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Desmin Antibody (RD301): sc-23879
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Desmin (h) | sc-400248 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DES code la desmine, une protéine de filament intermédiaire de type III qui constitue un échafaudage cytosquelettique essentiel dans les cellules musculaires cardiaques, squelettiques et lisses. La desmine s’intègre aux structures des disques Z et relie les myofibrilles aux mitochondries, aux noyaux et au sarcolemme, soutenant la mécanotransduction, le positionnement des organites et l’intégrité contractile. Elle participe à l’organisation du cytosquelette et aux processus de réponse au stress qui influencent la stabilité et le remodelage des cellules musculaires. Les altérations de DES sont associées à des myopathies et des cardiomyopathies liées à la desmine, caractérisées par une agrégation protéique et une dysfonction musculaire progressive, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la protéostase et des mécanismes de dégénérescence musculaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Desmin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DES dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DES, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DES à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Desmin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DES pour l'étude de la signalisation de Desmin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DES essentiels à la fonction de Desmin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DES pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Desmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Desmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DES. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Desmin plasmide HDR (h) et le Desmin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DES pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DES définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.